人乳头瘤病毒(HPV)抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
[原理]
本试剂盒采用亲和素-生物素化HPV抗原预包被板ELISA原理,检测人血清/血浆中存在的HPV-IgG抗体,配以酶标记抗人IgG单克隆抗体作为标记物。加入底物TMB显色后终止反应,在450nm波长测各孔O.D值,O.D值的大小与待检抗体含量成正比。生物素系统(biotin-avidinsystem)的稳固级联放大作用,使试剂的特异性、灵敏度、稳定性极大地提高。
[用途]
本试剂盒用于定性检测人血清/血浆中的HPV-IgG抗体,对人乳头瘤病毒感染的诊断有重要的价值。
[试剂盒组成]
1、生物素化抗原预包被板 1块(8X12/4X12)
2、阴性对照 1瓶
3、阳性对照 1瓶
4、标本稀释液 1瓶(20ml/10ml,直接使用)
5、酶结合物 1瓶(12/5ml,直接使用)
6、浓缩洗涤液
1瓶(20/10ml,加蒸馏水1:30稀释使用)
7、显示剂A、B 各1瓶(5/3ml)
8、终止液(2MH2SO4) 1瓶(5/3ml)
9、说明书 1份
[操作步骤]
将试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封后置于板架上。
标本稀释:用标本稀释液以1:101(5ul—500ul)稀释标本。于反应板中加已稀释待检标本及阴阳性对照(100ul)各一孔,设空白对照一孔(加100ul标本稀释液)轻拍混匀。
3.37℃温育30分钟。甩去孔内液体,用洗涤液洗板3次并在吸水纸上拍干。
4.加酶结合物:每孔2滴(或100ul),混匀后置37℃温育30分钟。同上法洗涤3次并拍干。
显色:每孔加显色剂A、B各1滴(或50ul),轻拍混匀(或震荡器混匀)后置37℃10分钟。
[结果判断]
目测:在白色背景下观察各孔显色情况,蓝色者为 阳性,无色者为阴性。
酶标仪测定:每孔加终止液1滴(或50ul),混匀后在450nm下测定各孔O.D值。
(1)S/N=标本O.D值/阴性对照O.D值。
(2)S/N≥2.1为阳性;
(3)1.5≤S/N<2.1为可疑标本;S/N<1.5为阴性。
(4)阴性对照(NC)小于0.10时以0.10计,大于0.1小于0.21时以实际O.D值计算;若大于0.21时,实验可能出现了较大误差,需重复实验。
(5)阳性对照(PC)值通常≥0.4,实验成立,否则需重做。
[注意事项]
1.微孔板须密封防潮,从冷藏环境中取出时,应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用,余者封存置2-8℃。
2.滴加试剂前应将液体翻转数次混匀,滴加时保持瓶身垂直。
3.洗涤时每孔均须加满,防止孔内有游离酶不能洗净。
4.试剂置2-8℃存放,不能冻结,有效期10个月。
5.避免用溶血、混浊或脂血标本。
6.**用新鲜标本,如需保存,可于2-8℃冷藏48小时或-20℃冻存4周(样本应避光)。