产品杀菌性能、抑菌性能与稳定性测试方法

C1 样品采集 为使 样 品 具有良好的代表性，应于同一批号三个运输包装中至少随机抽取20件Zui小销售包装样品，其中5件留样，5件做抑菌或杀菌性能测试，10件做稳定性测试。 C2 试验菌与菌液制备 C2. 1 试验菌 C2.1.‘】细菌:金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)，大肠杆菌(8099或ATCC 25922), C2.1.2酵母菌:白色念珠菌(ATCC 10231). 菌液 制 备 :取菌株第3^14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物(18^24h)，用5m L0 .03 m ol/L 磷酸盐缓冲液(以下简称PBS)洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用上述PBS稀释至所需浓度。 C3杀菌性能试验方法 该试 验 取 样部位，根据被试产品生产者的说明而确定。 C3. 1 中和剂鉴定试验 进 行 杀菌性能测试必须通过以下中和剂鉴定试验。 C3. 1. 1 试验分组 1) 染 菌 样片+5m LP BS, 2) 染 菌 样片+5mL中和剂。 3) 染 菌 对照片+5m L中和剂。 4) 样 片 十5m 1.中和剂+染菌对照片。 5) 染 菌 对照片+5m LPBS. 6) 同 批 次 PBS. 7) 同 批 次中和剂。 8) 同 批 次培养基。 C3.1.2 评价规定 1) 第 1组无试验菌，或仅有极少数试验菌菌落生长。 2)第2组有较第1组为多，但较第3,4,5组为少的试验菌落生长，并符合要求。3)第3,4,5组有相似量试验菌生长，并在1 X 100^-9X 10" cfu/片之间，其组间菌落数误差率应不 超过15X4)第6^-8组无菌生长。 5)连续3次试验取得合格评价。 GB 15979-2002 C3.2 杀菌试验 C3.2门操作步骤 将试验 菌 24h 斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为:用100川 滴于对照样片上，回收菌数为1X10"^-9X10"cfu /片)。 取被 试 样 片(2.0c mX 3.0cm)和对照样片(与试样同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌 处理)各4片，分成心组置于4个灭菌平皿内。 取 上述 菌悬液.分别在每个被试样片和对照样片上滴加100川J，均匀涂布，开始计时，作用2,5,10, 20 min，用无菌镊分别将样片投人含5m1，相应中和剂的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中 2-3个稀释度，分别吸取。.5 ml，置于两个平皿，用凉至40-45'C的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼 脂培养基(酵母菌)15 m1作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35C士2C培养48 h (细菌)或72 h(酵母菌)，作活菌菌落计数。 试验 重 复 3次，按式(C1)计算杀菌率: X, = ( A一 B )/ A X 1 00 写 . .. ... ... ... ... ... ... ... .. ... .( C l)式中:X, 杀菌率，%; A-— 对 照 样 品平均菌落数; B— 被 试 样 品平均菌落数。 C3.22 评价标准 杀菌 率 )90%，产品有杀菌作用 C4 溶出性抗(抑)菌产品抑菌性能试验方法 C4.1 操作步骤 将试 验 菌 24h斜面培养物用PBS洗下，制成菌悬液(要求的浓度为:用100川 滴于对照样片上或 5m1样液内，回收菌数为1X100^9X10"cfu/片或ml-). 取被 试 样 片(2-0c mX3,0c m)或样液(5mL)和对照样片或样液(与试样同质材料，同等大小，但不 含抗菌材料，且经灭菌处理)各4片(置于灭菌平皿内)或4管。 取 r述 菌悬液，分别在每个被试样片或样液和对照样片或样液上或内滴加 100k L，均匀涂布/混 合。开始计时，作用2,5,10,20min，用无菌镊分别将样片或样液(0.5 m L)投人含 5m L PBS的试管内，充分混匀，作适当稀释，然后取其中2--3个稀释度，分别吸取。.5 m l，置于两个平皿，用凉至40.45C的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(醉母菌)15 mL作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝 固后翻转平板.35C士2C培养48 h(细菌)或72 h(酵母菌)，作活菌菌落计数。 试 验 重 复3次，按式(C2)计算抑菌率: X, = ( A 一B )/ A X 1 00 纬 · ··· ‘ .，· ··· ··· ·“ ·· ··· ·· “ ·( C2 )式中:X;一抑菌率，%; A 一 对 照 样 品平均菌落数; B 一 被 试 样 品平均菌落数。 Cq.2 评价标准 抑菌 率 )SO0O-90%，产品有抑菌作用，抑菌率)90 ，产品有较强抑菌作用。 C5 非溶出性抗(抑)菌产品抑菌性能试验方法 C5.1操作步骤 称取 被 试 样片(剪成1.0cmxl.Ocm大小)0.75 g 分装包好 将0.758重样片放人一个250ml的三角烧瓶中，分别加人70 ml, PBS和5 mL菌悬液，使菌悬液 在PBS中的浓度为1 X100^-9X100,cfu/mLa GB 15979-2002 将 二 角 烧瓶固定于振荡摇床上，以300r /min振摇 1h o 取 。. 5m l振摇后的样液，或用PBS做适当稀释后的样液，以琼脂倾注法接种平皿，进行菌落计数。 同 时设 对照样片组和不加样片组，对照样片组的对照样片与被试样片同样大小但不含抗菌成分，其 他操作程序均与被试样片组相同，不加样片组分别取5ml菌悬液和70 mL PBS加人一个250 m工_三 角烧瓶中，混匀，分别于。时间和振荡1h后，各取。. 5ml菌悬液与PBS的混合液做适当稀释，然后进 行菌落计数。 试 验 重 复 3次，按式(C3)计算抑菌率: X = (A一B)/A X ⋯ ⋯ “ ··················。一(C3) 式中:X-一抑菌率，%; A 一 被 试 样品振荡前平均菌落数; B— 被 试 样 品振荡后平均菌落数。 C5.2 评价标准 不 加 样 片组的菌落数在 1X 1 0'-9X100c fu/mL之间，且样品振荡前后平均菌落数差值在 10%以内，试验有效;被试样片组抑菌率与对照样片组抑菌率的差值>26%，产品具有抗菌作用 C6 稳定性测试方法 C6，1 测试条件C6门.1 自然留样:将原包装样品置室温下至少1年，每半年进行抑菌或杀菌性能测试。 C6.1.2加速试验:将原包装样品置54^57℃恒温箱内14天或37-40'C恒温箱内3个月，保持相对湿 度>75，进行抑菌或杀菌性能测试。 C6.2 评价标准 产 品经自然留样，其杀菌率或抑菌率达到附录C3或附录C4、附录C5中规定的标准值，产品的杀 菌或抑菌作用在室温下的保持时间即为自然留样时间。产品 经 54C 加速试验，其杀菌率或抑菌率达到附录C3或附录C4、附录C5中规定的标准值，产品的杀菌或抑菌作用在室温下至少保持一年。 产品 经3'7C加速试验，其杀菌率或抑菌率达到附录C3或附录C4,附录C5中规定的标准值，产品 的杀菌或抑菌作用在室温下至少保持二年。