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产品简介:
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS
暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂
分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS有高度的亲和
性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在
细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性
就破坏了。因此,可以采用AnnexinV与7-AAD双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。
标记的 Annexin V可结合流式细胞仪用于检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸
1.用去离子水按 1:4 稀释结合缓冲液(4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水);
2.用 4C预冷的 PBS 洗细胞两次,用 250ul结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1x 106/ml;
3.取 100μl 的细胞悬液于5ml 流式管中,加入5μl Annexin V/PE 和10μl 7AAD 溶液;
4.混匀后于室温避光孵育15 分钟;
5.在反应管中加 400μl PBS,流式细胞仪(FACS)分析
(注:消化细胞时不能用含EDTA的胰酶)
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