在申请动物细胞外泌体的FDA DMF（Drug MasterFile）时，涉及的测试要求主要集中在以下几个方面，以确保外泌体的质量、安全性和有效性。具体测试要求如下：
一、物理化学特性
粒径分析：
测定外泌体的粒径分布，常用的方法包括纳米颗粒跟踪分析（NTA）或动态光散射（DLS）。
表面电荷（ζ电位）：
测定外泌体表面的电荷特性，以了解其在生物体内的稳定性和相互作用。
形态观察：
通过透射电子显微镜（TEM）或扫描电子显微镜（SEM）观察外泌体的形态特征。
二、生物学特性
活性测试：
评估外泌体的生物活性，包括对细胞的影响、信号传导路径等。常用细胞实验方法来评估其生物效应。
细胞摄取：
测定外泌体被目标细胞摄取的能力，通常通过荧光标记或追踪实验进行。
三、纯度和杂质分析
纯度测试：
确保外泌体的纯度符合规定标准，包括去除细胞残留物、培养基成分等。
污染物检测：
检测潜在的生物污染物（如细菌、真菌、病毒）以及化学污染物（如重金属、残留溶剂等）。
四、稳定性研究
短期和长期稳定性：
评估外泌体在不同存储条件下的稳定性，包括温度、湿度等影响因素。
加速稳定性试验：
在高温高湿条件下进行的加速稳定性试验，以预测长期储存的效果。
五、质量控制标准
制定质量标准：
针对上述测试结果，制定相应的质量控制标准，包括合格与不合格的判定标准。
验证检测方法：
确保所有检测方法经过验证，符合FDA的规范，能够提供可靠的测试结果。
六、文件记录
测试报告：
提交完整的测试报告，包括方法、结果、结论等，确保符合FDA的要求。
原始数据和记录：
保存所有实验的原始数据和记录，以备未来审核和合规检查。
在申请动物细胞外泌体的FDADMF时，需要进行一系列物理化学、生物学、纯度及稳定性等方面的测试，以确保外泌体的质量和安全性。遵循这些测试要求不仅有助于顺利通过FDA审核，还能为后续的市场准入提供保障。
