体外抗菌活性检测样品的制备以及常见的问题

抗菌药物是防治细菌感染性疾病的一类药物，种类多样，包括常用的青霉素类、头孢菌素类、β-内酰胺类等多种抗生素药物。抗菌活性常用于抗菌药物相关性能测定，其抑制或杀灭微生物的能力即称为抗菌活性，对于临床指导用药有重要意义。  

中科检测开展各种原料及产品的体外抗菌活性检测服务，具备CMA、CNAS资质认证，检测报告可用于原料及产品备案及产品研发，贸易凭证等。  

体外抗菌活性检测指标  

抗菌活性可以测试OD值、抑菌圈、振荡+平板涂布计数法、MIC、MBC等五个指标  

1、OD值测试：适合无颜色干扰、可溶性样品，例如粉末（可溶/不可溶）、金属、布料、塑料薄膜、凝胶；  

2、抑菌圈测试：适合活性成分可以溶出的样品，以及液体样品；  

3、振荡培养+平板涂布计数法：可用于不溶性样品抗菌活性评价，例如粉末（可溶/不可溶）、金属、布料、塑料薄膜、凝胶；  

4、MIC测试：适合已验证过具有抗菌活性且无颜色干扰的可溶性样品，例如可溶粉末活液体  

5、MBC测试：适合已检测过具有小抑菌浓度的样品；  

*如果之前没有做过抗菌实验，建议先做简单的抑菌圈或者OD值评估下抗菌效果。  

体外抗菌活性检测菌株  

中科检测体外抗菌活性检测提供的标准菌株有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、粘性放线菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌等。其他的菌株可以和工程师联系。  

待测菌株分类如下：  

革兰氏阴性菌代表：大肠杆菌（大肠埃希菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）；  

革兰氏阳性菌代表：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌；  

真菌代表：白色念珠菌（白色假丝酵母）。  

体外抗菌活性检测结果解读  

1、抑菌圈测试  

抑菌圈测试一般用作样品抑菌性能的定性测试。若产生抑菌圈，则说明样品有一定的抗菌性。若无抑菌圈产生，说明该测试方法条件下样品无抗菌性。  

针对液体样本可能与浓度呈正相关，但并不意味着样本浓度越高，抑菌圈越大。因为测试样本对指定的测试菌株有一定的抑菌阈值，且抑菌性还与样本本身扩散性有关。  

取出培养完成的平板，采用十字交叉法，用游标卡尺测量抑菌圈（透明圈）直径（mm），以直径表示抑菌圈的大小。  

抑菌圈直径（mm）=抑菌圈外径（mm）—样品直径/打孔孔径（mm）  

2、OD值测试  

通过差异性分析，P＜0.01代表实验组与对照组相比，有极显著性差异；*P＜0.05代表实验组与对照组相比，有显著性差异；P＞0.05代表实验组与对照组相比，无差异性。  

若OD600值实验组与对照组有极显著/显著性差异减小，则说明材料对测试菌株有抗菌性。  

3、平板涂布计数测试  

计数原则依据国家标准GB4789.2-2016，选取菌落数在30CFU~300CFU之间来进行菌落计数。在小稀释倍数下，若仍无菌落生长，则证明样品抑菌效果非常明显。  

菌液浓度（CFU/mL）计算方式：菌落数×稀释倍数×10（0.1mL稀释液涂布平板）  

抑菌率=（1-实验组菌液浓度/对照组菌液浓度）×  

4、MIC/MBC测试  

MIC（小抑菌浓度，Minimalinhibitionconcentration）判定标准：眼观无细菌生长的低药物浓度确定为MIC。  

MBC（小杀菌浓度，Minimumbactericidalconcentration）判定标准：眼观清澈的孔/管摇匀,吸取0.1mL涂布于固体培养基，培养一定时间后计数，菌落数少于5个的低稀释样品浓度确定为MBC。