目前,实时荧光RT-PCR检测2019新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸阳性是新型冠状病毒肺炎(以下简称“新冠肺炎”)诊断的金标准[1],但有临床医生发现,新冠肺炎影像学表现与核酸检测结果有不一致的病例,也出现了诸如“检测4次,才发现核酸阳性”“CT结果来做确诊,不要迷信核酸”等具有争议的报道。核酸检测具有早期、敏感、特异性高、易操作等优势,但对于核酸检测结果的准确性,需要从样本类型、质量、实验因素、试剂盒性能及患者感染周期等影响因素来综合分析[2],尤其针对难诊断病例应当更加严格地控制检测准确性。本研究拟通过对1例2019-nCoV感染患者不同时间点送检标本、不同试剂检测结果进行比较分析,评价不同试剂盒性能,发现和提出目前2019-nCoV核酸检测试剂盒需要改进之处,提高筛查准确性。
各试剂的基本情况各试剂的基本情况比较见表1。6种试剂检测基因类型均为ORF1ab和N基因,A和D试剂含内标;A和B试剂可采用一步裂解法提取核酸,其余试剂均可采用磁珠法或柱提法(本研究未采用)提取核酸;C和E试剂低检测限为1000copies/mL,F试剂说明书未提及,其余均为500copies/mL;6种试剂RNA上样量、荧光检测和扩增循环数及结果判断稍有差异。本研究采用的标本类型为咽拭子,6种试剂均适用。本研究仅针对相应批号试剂。
不同试剂的检测结果分析对该患者的3次采样样品分别采用不同试剂核酸检测,结果见表2。C和F试剂检测ORF1ab和N基因3次结果均为阳性,但结果曲线图C试剂优于F试剂,见图1;D试剂均未检出N基因,A、B、E试剂均有未检出ORF1ab情况存在。其中A试剂检出率66.6%(4/6),B试剂试剂检出率66.6%(4/6)、C试剂试剂检出率100.0%(6/6)、D试剂试剂检出率50.0%(3/6)、E试剂试剂检出率83.3%(5/6)、F试剂试剂检出率100.0%(6/6)。
不同试剂重复检测结果CT值6种试剂(A~F)重复检测结果CT值见表3,批内检测结果的CV见表4。结果显示:C试剂的批内重复性佳(CV小),B试剂第3次检测ORF1ab批内变异系数(CV批内)大,其余试剂(A、D、E、F)批内重复性检测结果CT值差异不明显。