细胞毒性试验-体外细胞毒性试验

细胞毒性试验是指通过测定细胞毒性物质对细胞的作用，来评估其对细胞的毒性效应。常用的细胞毒性试验方法包括染料排斥法、比色法、荧光检测法、化学发光法等等。其中，*常用的方法是细胞坏死率（LDH）法。细胞毒性试验是评估细胞毒性物质毒性效应的重要方法之一，它可以帮助确定试验物质的安全性和可行性，为安全使用该物质提供科学依据。

细胞毒性试验方法可以分为体外细胞培养试验和体内细胞试验两种：

体外细胞培养试验方法：

提取物试验：适用于检测医疗器械可溶性物质的毒性，通常与动物毒性试验的结果一致。

直接接触法：检测医疗器械细胞毒性*灵敏的方法，具有较弱的细胞毒性，也可以测量医疗设备。

琼脂覆盖法：适用于毒性较大的医疗器械和批量过滤。

分子过滤法：适用于小分子量医疗器械毒性成分的生物相容性评价。

体内细胞试验方法：

细胞计数法：适用于检测组织器官细胞的数量和体积的变化。

X—射线晶体结构分析（CXBFA）：通过分析细胞内化合物的晶体结构，可以推断出毒物的作用机制，用于解释毒理学数据。

流式细胞术：通过检测细胞表面分子的变化，可以确定毒物是否影响了细胞的功能。

细胞凋亡检测：通过检测细胞形态学上的变化和DNA断裂，可以确定毒物对细胞的损伤作用。

细胞动力学检测：通过检测细胞运动的变化，可以确定毒物是否对细胞造成了伤害。

分子生物学检测：通过检测基因表达的变化，可以确定毒物对细胞的作用机制。

细胞毒性试验通常包括体外细胞培养试验和体内细胞试验两种。

下面是这两种试验的细胞毒性试验流程：

体外细胞培养试验流程：

预实验：收集对数生长期细胞，根据细胞扩增传代时的细胞生长速度同比列计算出细胞生长84小时后汇合度达到****时的细胞铺板密度，以之作为中心密度，以1.25倍为梯度，往前/往后各梯度稀释4个密度，种到实验所用类型的细胞板中。

收集对数生长期的细胞，根据预实验结果稀释好细胞悬液，以50μL/孔接种到96孔板中（384孔板为25μL/孔），37℃5%CO2培养过夜。

待细胞完全贴壁后每孔加入50μL/孔（384孔板为25μL/孔）的待测工作液，37℃5%CO2继续培养72小时。

每孔加入10μL（384孔板为5μL）的CCK8试剂（注意不要产生气泡，会影响OD值的读数），37℃5%CO2孵育1~4小时。

用酶标仪在450 nm波长处测定吸光度。

数据计算：%抑制率=(1-(ODS-ODBLK)/(ODNC–ODBLK))×****

其中：ODS:样品孔的吸光值（细胞+待测化合物）ODNC:阴性孔吸光值（细胞+溶媒）ODBLK:空白孔吸光值（培养基+溶媒）

体内细胞试验流程：

处理流程：将处理好的细胞取出，吹打均匀后制片、洗片、晾干，进行相应的检测。