样本数量评估与比对测试开展，结果应一致，zui终为30个阳性和30个阴性样本；PPA和NPA应各大于等于95%。如果为多种样本类型寻求授权，则应评估每种样本类型。
FDA建议，仅使用经FDA批准或EUA授权的高灵敏度RT-PCR测定。若提供的分析数据证明:小于等于-70度下冷冻保存的样品与新鲜采集样品相比，不影响测试结果的准确性，则可使用冷冻样品。
FDA建议，在医疗保健提供者对疑似猴痘患者的前瞻性、盲法、随机研究中，使用天然临床标本（如果有）。若在提交时没有可用前瞻性或回顾性标本，则可接受完全人为的临床评估。
FDA将阳性自然临床标本的额外临床测试作为EUA授权条件：每个人为的临床标本都应使用独特的天然临床标本基质制备，一半应在LoD处准备，一半应覆盖测试范围，zui高不超过5xLoD。
如果评估自然临床样本，低阳性样本比例应为20%。
