猴痘检测EUA分析性能验证要求

• 病毒材料应该以定量病毒添加到天然的阴性临床基质中来进行制备。

• 活病毒和灭活病毒是分析性能评估的材料，但也可以使用天然基因组DNA或合成的DNA，若选择后者，FDA建议对此先进行pre-EUA。

• 如果标本采集涉及拭子的使用，应该将病毒材料掺入拭子上，按照产品说明进行测试。

1. 检出限（LoD）

• 对于LoD的测定，应确定初始LoD，大概步骤为对病毒材料进行2-3倍系列稀释，每个浓度进行3个重复；再初始LoD的基础上进行20次重复，来确定zui终的LoD结果。

• 若产品说明声称多种临床类型，那么，每个对应的临床阴性基质都需要进行评估LoD。

• 若产品是非天花的正痘检测试剂盒，那么，需要至少用两种非天花正痘病毒进行LoD的验证，或者可以使用合成DNA代替。

  
  

2. 包容性研究

• 主要完成生物信息学分析的包容性研究。

• 针对猴痘病毒的包容性分析主要包括：西非进化枝（cladeII），刚果盆地进化枝（cladeI），以及BEI提供的扎伊尔毒株。

• 而针对天非天花正痘病毒的包容性分析包括：猴痘病毒、牛痘病毒、鼠痘病毒、骆驼痘病毒、痘苗病毒等。

• 并针对公开数据库（如NCBI，GISAID等）适用的核酸序列进行包容性分析。

• 若配对比例低于10 0%，需要提供错配对性能影响的风险评估。

• 还需要持续监可能影响分子测试性能的新的病毒变体。

3. 交叉反应研究

• 需要对列举的33种病原体进行交叉反应测试。

• 对于没有进行测试的病原体需提供理由，并需要以生物信息学分析这些病原体与产品引物探针的配对比例，并标明二者同源性>80%的病原体。

4. 微生物干扰研究

• 从交叉反应研究中分析出与产品引物探针配对同源性>80%的病原体进行微生物干扰检测。

• 若不进行检测，需要说明为什么产品的测试性能不会受到临床上合并感染的病原体的影响。

• 或者解释计算机模拟结果与临床无关。

5. 内外源干扰物质研究

• 提供了20种内外源的干扰物质列表。

• 建议以2-3倍LoD对每种物质进行三次重复的检测。

6. 样本稳定性

• 对新鲜制备的3倍LoD的病毒材料进行室温2小时的样本稳定性评估。

• 若需要对冷冻的临床样品进行检测，则需要在等效性研究中评估新鲜和冷冻样品对性能评估的差异。

• 试剂稳定性，可仅提供方案。

由以上可以看出，与国内注册指导原则不同的是，美国EUA并未对precision作相关要求，并且在递交EUA的时候，关于stability上，只需要递交方案即可，测试数据可以在获得EUA授权后后补，这使得猴痘试剂EUA分析性能测试完成速度要比国内注册要快。