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样品的采集和储存
以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清:4000rpm 条件下离心 20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在-20℃以下,避免反复冻融。
2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在-20℃以下,
避免反复冻融。
3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm 条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。样本收集
后,无法一次检测完毕,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。
4、组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9
的重量体积比,比如1g的组织样品对应9 mL的 PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶剂)加入
玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。Zui后将匀浆液5000xg离心5-10分
钟,取上清检测。
5、细胞提取液:贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗,用胰蛋白酶消化,1000xg离心5分钟后收集细胞;悬浮细胞可直接离心收集。收集的
细胞用冷的 PBS 洗涤3次。每1x106个细胞中加入150-200μLPBS重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少PBS 的体积)。
将提取液于 1500xg离心10分钟,取上清检测。
6、其他生物体液:1000xg离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
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