GB 20287 农用微生物菌剂（GB 20287-2006）国家标准

前   言本标准的5.1、5.3和第8章条文为强制性条款，其余为推荐性条款。本标准的附录A、附录C和附录D为规范性附录，附录B为资料性附录。农用微生物菌剂1　范围本标准规定了农用微生物菌剂（即微生物接种剂）的术语和定义、产品分类、要求、试验方法、检验规则、包装、标识、运输和贮存。本标准适用于农用微生物菌剂类产品。2　规范性引用文件（略）3　术语和定义（略）4　产品分类产品按剂型可分为液体、粉剂、颗粒型；按内含的微生物种类或功能特性可分为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂、硅酸盐微生物菌剂、光合细菌菌剂、有机物料腐熟剂、促生菌剂、菌根菌剂、生物修复菌剂等。5　要求5.1　菌种  生产用的微生物菌种应安全、有效。生产者应提供菌种的分类鉴定报告，包括属及种的学名、形态、生理生化特性及鉴定依据等完整资料。生产者应提供菌种安全性评价资料。采用生物工程菌，应具有允许大面积释放的生物安全性有关批文。5.2　产品外观（略）5.3　产品技术指标5.3.1　农用微生物菌剂产品的技术指标见表1，其中有机物料腐熟剂产品的技术指标按表2执行。                 表1 农用微生物菌剂产品的技术指标项   目剂  型液 体粉 剂颗粒有效活菌数(cfu)a ，亿/g(mL)≥2.02.01.0霉菌杂菌数，个/g(mL)≤3.0×1063.0×1063.0×106杂菌率，%≤10.020.030.0水分，%≤-35.020.0细度，%≥-8080pH值5.0~8.05.5~8.55.5~8.5保质期b，月≥36a复合菌剂，每一种有效菌的数量不得少于亿/g(mL)；以单一的胶质芽胞杆菌（Bacillusmucilaginosus）制成的粉剂产品中有效活菌数不少于1.2亿/g。b 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。               表2 有机物料腐熟剂产品的技术指标项目剂   型液 体粉 剂颗 粒有效活菌数(cfu)，亿/g(mL)≥1.00.500.50纤维素酶活a，U/g（mL）≥30.030.030.0蛋白酶活b，U/g(mL)≥15.015.015.0水分，%≤-35.020.0细 度，%≥-7070pH值5.0～8.55.5～8.55.5～8.5保质期c，月≥36a以农作物秸秆类为腐熟对象测定纤维素酶活。b 以畜禽粪便类为腐熟对象测定蛋白酶活。c此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。5.3.2　农用微生物菌剂产品中无害化指标见表3。          表3 农用微生物菌剂产品的无害化技术指标参数标准极限粪大肠菌群数，个/g(mL)≤100蛔虫卵死亡率，%≥95砷及其化合物（以As计），mg/kg≤75镉及其化合物（以Cd计），mg/kg≤10铅及其化合物（以Pb计），mg/kg≤100铬及其化合物（以Cr计），mg/kg≤150汞及其化合物（以Hg计），mg/kg≤56　试验方法6.1　仪器设备（略）6.2　试剂（略）6.3　产品参数的检测6.3.1　外观(感官)的测定取少量样品放到白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中，仔细观察样品的颜色、形状、质地。6.3.2　有效活菌数的测定采用平板计数法，根据所测微生物的种类选用适宜的培养基。若采用Zui大可能数（MostProbable Number，MPN）5管法，遵照附录C的规定。6.3.2.1　系列稀释称取样品10 g（jingque到g），加入带玻璃珠的100 mL的无菌水中(液体菌剂取l0.0 mL加入90 mL的无菌水中)，静置20 min，在旋转式摇床上200r/min充分振荡30 min，即成母液菌悬液（基础液）。用无菌移液管分别吸取5.0mL上述母液菌悬液加入45mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。6.3.2.2　加样及培养每个样品取3个连续适宜的稀释度，用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂于琼脂表面。每一稀释度重复3次，以无菌水作空白对照，于适宜的条件下培养。6.3.2.3　菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。6.3.2.4　菌落计数以出现20~300个菌落数的稀释度的平板为计数标准（丝状真菌为10~150个菌落数），分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度，其平均菌落数在20～300个之间时，则以该平均菌落数计算。若有两个稀释度，其平均菌落数均在20～300个之间时，应按两者菌落总数之比值决定。若其比值小于等于2应计算两者的平均数；若大于2则以稀释度小的菌落平均数计算。有效活菌数按式（1）或式（2）计算：          nm = kv1/(m0v2) ×10-8                           …………………（1）nv = kv1/(v0v2) ×10-8                              …………………（2）式中：nm —质量有效活菌数，         亿/g        nv — 体积有效活菌数，         亿/mL        — 菌落平均数，            个k — 稀释倍数v1 — 基础液体积，            mLv2 — 菌悬液加入量，          mLv0 — 样品量，                mLm0 — 样品量，               g6.3.3　霉菌杂菌数的测定采用马丁培养基，测定方法同6.3.2。6.3.4　杂菌率的测定除样品有效菌外其它的菌均为杂菌。样品中杂菌率按式（3）计算：           m = n1/(n1+n)×100                            …………………（3）式中：m — 样品杂菌率，            %          n1 — 杂菌数，               亿/g(mL)          n — 有效活菌数，           亿/g(mL)6.3.5　水分的测定将空铝盒置于干燥箱中105 ℃±2 ℃烘干 0.5h，冷却后称量记录空铝盒的质量。称取2份平行样品（颗粒型样品，应先粉碎过1.0 mm试验筛），每份20 g（jingque到g），分别加入铝盒中并记录质量。将装好样品的铝盒置于干燥箱中105 ℃±2 ℃下烘干4 h~6 h。取出置于干燥器中冷却20min后进行称量。水分含量按式（4）计算（结果为两次测定的平均值）：       w = (m1- m2)/( m1- m0) ×100                  …………………（4）式中：w — 样品水分含量，          %m0 — 空铝盒的质量，          gm1 — 样品和铝盒的质量，       gm2 — 烘干后样品和铝盒的质量，g6.3.6　细度的测定6.3.6.1　粉剂样品称取样品50 g（jingque到0.1 g），放入300 mL烧杯中，加200mL水浸泡10 min~30 min后倒入孔径0.18mm的试验筛中，用水冲洗，并用刷子轻轻地刷筛面上的样品，直至筛下流出清水为止。将试验筛连同筛上样品放入干燥箱中，在105 ℃±2℃烘干4 h ~6h。冷却后称量筛上样品质量。样品细度按式（5）计算：s ={1- m1/[ m0（1-w）]} ×100                 …………………（5）式中：s — 筛下样品质量分数，    %m0 — 样品质量，            gw  — 样品含水量，          %m1 — 筛上干样品质量，       g6.3.6.2　颗粒样品称取样品50g（jingque到0.1 g），将两个不同孔径的试验筛（1.0 mm和4.75mm）摞在一起放在底盘上(大孔径试验筛放在上面)。样品倒入大孔径试验筛内筛样品，称小孔径试验筛上的样品质量。颗粒细度按式（6）计算：      g = m1 /m0 ×100                                      …………………（6）式中：g — 样品质量分数，         %m1 — 小孔径试验筛上样品质量，gm0 — 样 品 质 量，          g6.3.7　pH值的测定打开酸度计电源预热30min，用标准溶液校准。pH值的测定，每个样品重复三次，计算三次的平均值。6.3.7.1　液体样品用量筒取40mL样品放入50mL的烧杯中，直接用酸度计测定，仪器读数稳定后记录。6.3.7.2　粉剂样品称取样品15 g，放入50mL的烧杯中，按1:2(样品:无离子水)的比例将无离子水加到烧杯中(如果样品含水量低，可根据基质类型按1:3~1:5的比例加无离子水)，搅拌均匀。静置30min，测样品悬液的pH值，仪器读数稳定后记录。6.3.7.3　颗粒样品样品先研碎过1.0mm试验筛，按照6.3.7.2的方法测定。6.3.8　粪大肠菌群数的测定应符合GB/T19524.1《肥料中粪大肠菌群的测定》的规定。6.3.9　蛔虫卵死亡率的测定应符合GB/T19524.2《肥料中蛔虫卵死亡率的测定》的规定。6.3.10　纤维素酶活、蛋白酶活的测定应符合附录D的规定。6.3.11　砷、镉、铅、铬、汞的测定应符合GB18877—2002中的5.12~5.17的规定。6.3.12　保质期的检验在产品说明书标明的保质期前，按6.3.1~6.3.11方法测定产品相应指标。7　检验规则本标准中产品技术指标的数字修约应符合GB8170的规定；产品质量合格判定应符合GB1250中修约值比较法的规定。7.1　抽样按每一发酵罐菌液（或每批固体发酵）加工成的产品为一批，进行抽样检验，抽样过程严格避免杂菌污染。7.1.1　抽样工具无菌塑料袋(瓶)，金属勺、抽样器、量筒、牛皮纸袋、胶水、抽样封条及抽样单等。7.1.2　抽样方法和数量一般在成品库中抽样，采用随机法抽取。抽样以件为单位，小包装以每一包装箱为一件。随机抽取3~5件，每件中随机抽取一袋(瓶)；若每袋(瓶)包装小于500g（mL）的产品，应多抽几件。大包装产品以一袋(桶)为一件，随机抽取5~10件，在无菌条件下，每件取样500g(mL)，将抽取样品混匀，按四分法分装3袋(瓶)，每袋（瓶）不少于500g(mL)。7.2　检验分类（略）7.3　判定规则7.3.1　具下列任何一条款者，均为合格产品a. 检验结果各项技术指标均符合标准要求的产品；b. 在产品的外观、水分、细度、pH值等检测项目中，有1项不符合要求，而其它各项技术指标符合要求的产品。7.3.2　具下列任何一条款者，均为不合格产品a. 有效活菌数不符合技术指标；b. 霉菌杂菌数不符合技术指标；c. 杂菌率不符合技术指标；d. 粪大肠菌群不符合技术指标；e.    蛔虫卵死亡率不符合技术指标；f. 砷、镉、铅、铬、汞中任一含量不符合技术指标；g.有机物料腐熟剂产品中所测酶活不符合技术指标；h. 在外观、水分、细度、pH值等检测项目中，有2项（含）以上不符合要求。8　包装、标识、运输和贮存  参见NY 885-2004《农用微生物产品标识要求》