样品的采集是微生物检验的重要组成部分，用于检验的样品数量和状况具有重要意义。这对取样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检验过程在无菌操作的条件下进行。小编整理了部分微生物检测过程中取样、样液制备、稀释、接种、培养的简单操作，大家一起学习参考。
一、微生物取样及样液制备
1样品标识
取样时，将样品按不同的污染程度从低污染程度到高污染程度顺序排列，
并对出对应的标识，其中按细菌数平皿、大肠菌群平皿、金黄色葡萄球菌平皿的顺序，2-3个样品一摞。如图
2样品采取
（1）固体样品
①开启部位及其周围用酒精棉进行消毒，再用火焰灭菌的剪刀剪开
②在电子称上放入无菌均质袋（手不要碰及袋口）去皮调整至零
③用火焰灭菌后的剪刀和镊子取样，称取25g样品
④加入225ml灭菌磷酸盐缓冲液（开盖瓶塞时瓶口部和瓶塞应在火焰通过1-2次，以杀灭从空气中落入杂菌）后，均质或待均质，如图
⑤擦拭干净剪刀镊子后浸泡于75%酒精容器中并将样品封口；将袋子折叠后用拍击式均质器均质约30秒作为样液，此时均质袋内要设定为不含空气（可根据样品不同情况相应调整均质时间）
（2）液体样品
①冷冻样品完全解冻后使用。
②75%酒精棉消毒开启部位及其周围，再用火焰灭菌的剪刀开启，用灭菌吸管取充分混合后样25ml。
③同上④⑤。
(3)粉末状样品以及半固体样品
①将样品混合均一化。
②75%酒精棉消毒开启部位及其周围，再用火焰灭菌的剪刀开启，以无菌匙采取混合后样10g。
③加入90ml灭菌磷酸盐缓冲液，开盖瓶塞时瓶口部和瓶塞应在火焰通过1-2次，以杀灭从空气中落入杂菌。
④同上⑤。
注意
1、从罐头取样时，在表面放上小块酒精棉（倒上少量酒精）点火燃烧后开罐。罐头起子用酒精棉擦拭火焰灭菌后使用。
2、75%酒精必须保证一周换3次，如果容器内有明显的污物应立即更换；火焰灭菌的剪刀、镊子通过火焰4-5s即可
二、样液稀释方法
①从均质袋准确吸取样液1ml，如图
②沿管壁徐徐接种到含9ml磷酸盐缓冲液里，盖上试管塞后充分震荡混匀为1：100稀释液。（勿使吸管尖 端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。）
③重复该操作，按需要配制1：1000、1：10000…稀释液。
④为减少样品稀释误差，在连续递增稀释时（原液在前稀释液在后），每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。
⑤不要在稀释剂中吹洗吸管。
1、样液稀释必须加以足够震摇，确保液体混匀，形成的菌落能以10倍递增或递减，符合逻辑性。
2、车间产品根据加工工艺或对污染情况的估计选择合适的稀释倍。（尤其注意葱、姜、蒜等无加热类产品、保存实验、外调新厂家、样品开发、原料等样品）。
三、样液接种方法：
①从吸管筒沿筒上壁抽出吸管，在火焰旁吹洗吸耳球同时在吸管尾端插上吸耳球后，从吸管尾端至尖 端快速通过火焰，并且排空吸管里残留的水，如图
②吸管插入均质袋样液内的深度不超过2.5cm处，准确吸取样品匀液，吸管尖不要碰着袋口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其离开液面并贴在袋内将液体调至所要求的刻度。
1ml、1ml、1m、0.2ml无菌操作分别以2～4s内完全注入已标识清楚的细菌数、大肠菌群、EC以及金黄色葡萄球菌平皿中，接种后迅速震荡均匀，如图
③如果在接种前，某一样品液体放置超过3 min，应重新均质；为了验证稀释液、培养基、平皿、吸管等器具无菌需做空白对照。
四、倾注倒药方法
右手持培养基三角瓶（已放50-60℃的水浴中恒温）置火焰旁边，用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝，迅速倒人培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上；也可将平皿放在火焰附近的桌面上用左手的拇指和食指打开培养皿，再注入培养基，摇匀，如图
1、培养基在50-60℃水浴中的保温时间不要超过4h；从采样开始到分注培养基操作限于20min以内。
2、涂布的平皿表面需干燥（干燥不充分易发生菌落扩散，有冷凝水不利于细菌分离并且会导致细菌繁殖使结果失真；干燥过分，会导致培养基裂开，不能用；干燥合适，则样液吸收完全、快）。
3、玻璃器皿的表面容易被细菌吸附，所以菌液注入平皿后应尽快将平皿内的样液和琼脂培养基充分混合，否则细菌不容易分散。混合方法是将平皿倾斜和旋转使之充分混合，但要注意不要让培养基从培养皿内溢出，且不要粘附在平皿壁和盖上。
五、平皿培养
（1）将平皿倒置放入恒温培养箱中，平皿间要留有空隙进行空气流通，使培养物的温度尽快与培养箱温度达到一致，按照规定的温度和时间进行培养并保持一定的湿度，经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15％。
（2）斜面、高层斜面、液体培养基立在试管架上放入恒温培养箱中，按所规定的时间温度进行培养。
